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乐果分子印迹定量检测试剂盒技术

乐果是一种常用的含硫有机膦杀虫剂,是具有触杀和胃毒作用的内吸性杀虫剂和杀螨剂,广泛应用于谷物、棉花、蔬菜,果树等农作物上的螨类、蚜科、粉虱科等多种害虫的防治。但乐果较易挥发,大量散失的农药挥发到空气、水体以及沉降聚集在土壤中污染农畜渔副产品,并通过食物链的富集作用转移到人体,对人体产生危害。目前乐果定量测定方法有:气相色谱法(GC)、高效液相色谱-紫外检测法(HPLC-UV)、气相色谱-质谱联用法(GC-MS)等。色谱法需要昂贵的仪器和经过专业训练的操作人员,所用时间也较长。因此,建立一种测试费用低、操作简便、灵敏度高的测试方法,对提高农药的利用率及控制用量有着非常重要的意义。

分子印迹技术(molecular imprinting techniqueMIP),又称为分子烙印,是指以某特定的目标分子为模板,用化学的方法制备对该分子具有特异识别能力的高度交联聚合物的技术。分子印迹膜是一种兼具分子印迹技术与膜分离技术优点的新兴技术。目前的商品膜(如超滤、微滤及反渗透膜)都无法实现单个物质的选择性分离,而分子印迹膜具有分子特异性识别能力,能将特定目标分子从其结构类似物的混合物中分离出来;与传统分子印迹聚合物相比,分子印迹膜具有无需研磨等繁琐的制备过程,传质阻力小,易于应用等独特的优点;同时比一般生物材料更稳定,抗恶劣环境能力更强。

技术特点

1. 分子印迹试剂盒可简单、快速、定量检测,灵敏度可与色谱法相媲美

本技术采用分子印迹膜与荧光检测相结合的方法测定乐果含量,充分利用分子印迹膜对乐果分子的特异性吸附和荧光检测的简便与灵敏,从而达到简便、快速、灵敏检测乐果含量。

采用分子印迹膜-荧光分光光度法测定乐果含量,较单一荧光分光光度法测定(表1)提高了灵敏度,检测限0.2降低至0.05mg/L(图1)。

1荧光测定乐果含量检测

 

1分子印迹-荧光检测标准曲线

色谱法能较准确地检测乐果的残留量(线性范围1mg/L-10mg/L,图2),但色谱法存在色谱仪器设备昂贵、分析方法繁琐且耗时长、不能快速大批量检测样品等问题。分子印迹-荧光法可实现复杂体系中乐果含量快速测定,避免了繁琐的纯化步骤,其灵敏度可与色谱法相媲美

2气相色谱与液相色谱技术检测乐果含量(线性范围1mg/L-10mg/L

茶叶加标回收率实验(表2),测得相对标准偏差为0.050.34,加标回收率在92~105之间。说明该方法具有较高的灵敏度和准确度。

2茶叶中乐果回收结果

2.制备过程简单,可操作性强,制备成本低廉

分子印迹试剂盒生产工艺主要包括:相转化法生产基膜、脱氧膜液生产、分子印迹膜生产,洗膜干燥。制备工程简单、易控,可操作性强,可实现全自动操作。所有生产设备均为常用设备,设备投资较小。生产主要设备包括:反应锅,制膜机,及膜干燥设备。

分子印迹试剂盒成本因检测指标不同差异较大(成本主要来源标品成本),一般是酶联免疫试剂盒的二十分之一以上,选择性更好更专一,灵敏度更高。

3. 分子印迹膜可反复使用,稳定性好,易储存

分子印迹膜稳定性好,在高温、高压、酸、碱及高浓度离子等各种条件下也能保持其原有的特性。它能反复使用达100之多,在室温下保藏8个月而记印能力不变。分子印迹试剂盒使用范围较宽,可测定各类食品;检测费用相对较低,是食品检测试剂盒发展的主要方向。

 

技术成熟度

       分子印迹膜对目标分子具有极高的特异性识别,所采用的荧光及紫外测定方法能对目标分子浓度进行准确定量,显色反应可对目标分子进行定性定量测定。我们利用分子烙印聚合物和分子印迹膜技术,完成并建立了部分农药、抗生素和毒素的检测方法,成功研制了相关试剂盒。

 

市场优势分析

据统计,目前全国从事食品质量安全监督管理的机构共计4000多个,人员10多万人。每年全国质检系统150万批次的产品质量检验中,食品质量安全检验就占了一半。平均每批次的检验费用约为2000元,食品安全检验费用约为15亿元,试剂费要占15%左右,检测试剂需求约为2.25亿元;出入境检验检疫部门是食品安全检测的主要机构之一,所需食品检测试剂费用最高。我国出入境检验检疫共有163个检验检疫技术中心,300多个食品检测实验室,抽检样品数量巨大,近年来,数量还在快速增加。现仅以杭州市萧山区出入境检验检疫局为例,去年2010年全年仅该局卫食处抽检出境样品有3400批次,入境样品1000批次,总数达4400批次。按照我国海关食品检验收费标准,如按照每批次3000元检测费用计算,我国全年食品检验费用约为117亿元。其中检测试剂费用可占15%,这样进出口检验平均每年的试剂需求为17.55亿元。由此,我国仅政府食品监督部门所需检测试剂费用为20亿元左右。部分科研院所、企业等对产品检测试剂也有一定需求。

随着人们对食品安全的高度重视,和国家在食品安全监管方面更强的组织管理队伍和更多的资金投入,加强食品快速、实时安全评价是当务之急。当前,对食品中抗生素、农药残留、违规食品添加剂检测试剂盒的开发颇为关注,市场份额逐年提高。但是,目前酶联免疫试剂盒对农药残留检测价格在3600-4800元之间,检测一个样品需要80-90元,甚至100元以上。本项目研制的分子印迹检测试剂盒准确性与免疫试剂盒相当,而价格可低几倍甚至几十倍,市场前景广阔。